Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 4:36 min. • April 30th, 2023
La metilación del ADN implica la adición de grupos metilo a los residuos de citosina del ADN para formar metilcitosina, lo que provoca la alteración del ADN y la regulación de la expresión génica.
Para estudiar la metilación del ADN, comience tomando extracto de ADN crudo de células cancerosas. Agregue un tampón de dilución e incube a temperatura ambiente. El tampón diluye la mezcla y desnaturaliza el ADN bicatenario en ADN monocatenario, favoreciendo la accesibilidad de las bases para reacciones posteriores.
Agregue un reactivo de conversión e incube en la oscuridad. El bisulfito de sodio en el reactivo desencadena la sulfonación y la posterior desaminación de los residuos de citosina no metilados, lo que da como resultado la formación de uracilo-sulfonato. Sin embargo, los residuos de citosina metilada permanecen sin cambios.
A continuación, complemente el ADN con un tampón de unión y transfiéralo a una columna de filtro de espín preensamblada. El tampón ayuda al ADN a unirse al filtro.
Centrifugar para eliminar la mezcla de tampón y reactivo de bisulfito del ADN atrapado en la columna. Deseche el flujo continuo. Agregue un tampón de desulfonación alcalina al ADN. El tampón ayuda
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