Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 4:00 min. • April 30th, 2023
La tinción de fibras elásticas ayuda a examinar la invasión de células cancerosas más allá de la lámina elástica peritoneal o el tejido elástico submesotelial.
Para comenzar, agregue una solución de permanganato de potasio a una sección de tejido procesado, seguida de una inmersión en ácido oxálico. La fuerte propiedad oxidante de la combinación de permanganato de potasio y ácido oxálico blanquea el pigmento natural de la sección de tejido para evitar interferencias con el proceso de tinción al oscurecer la morfología de la fibra elástica.
Enjuague el portaobjetos con agua y etanol para eliminar cualquier agente blanqueador residual. A continuación, incube la muestra en una tinción de elastina que comprende un complejo hierro-hematoxilina. La elastina, el principal componente de la fibra elástica, tiene una fuerte afinidad por los complejos hierro-hematoxilina.
Lave el portaobjetos con etanol y agua para eliminar cualquier mancha residual. Finalmente, trate la muestra con una contratinción que contenga ácido pícrico y Ponceau S. Las moléculas de ácido pícrico más pequeñas penetran en todos los tipos de tejidos, pero son retenidas firmemente por el músculo de textura cerrada y las células cancerosas. Por el contrario, las moléculas Ponceau S más grandes desplazan el ácido pícrico en el colágeno de textura porosa, lo que hace que el colágeno se tiña de manera diferente al músculo y las células cancerosas.
Cuando se observan bajo un microscopio, las fibras elásticas aparecen como filamentos azul-negros. El colágeno se tiñe de rojo, mientras que las células musculares y cancerosas aparecen amarillas. Las células cancerosas amarillas que penetran en la lámina elástica azul-negra confirman la invasión metastásica.
Primero, use papel de seda para limpiar cualquier exceso de solución en el portaobjetos o alrededor del pañuelo. Coloque los portaobjetos en condiciones que coincidan con la temperatura y la humedad ambiente. Agregue unas gotas de permanganato de potasio a cada portaobjetos para oxidarlos, asegurándose de que el volumen agregado sea suficiente para cubrir la sección de tejido en cada portaobjetos. Después de 5 minutos, enjuague los portaobjetos oxidados con agua destilada en frascos Coplin, repita el enjuague dos o tres veces y use un frasco nuevo de agua para cada enjuague. El tejido debe tener un color marrón observable.
Ahora, agregue unas gotas de ácido oxálico a cada portaobjetos para blanquearlos, asegurándose de que el volumen agregado sea suficiente para cubrir la sección de tejido en cada portaobjetos. Después de 5 minutos, enjuague los portaobjetos de lejía con agua destilada, repita el enjuague dos o tres veces y use un frasco nuevo de agua para cada enjuague. Lave los portaobjetos brevemente con alcohol al 95%.
Sumerja los portaobjetos lavados en una solución de elastina durante 8 a 24 horas. Luego, sumerja los portaobjetos directamente en etanol al 95% durante 1 a 2 minutos para diferenciar bien cada sección de tejido. Enjuague completamente los portaobjetos con agua destilada.
Verifique microscópicamente las manchas de fibras elásticas azul-negras y el fondo gris. Es mejor subdiferenciar ligeramente el tejido, ya que la contratinción de Van Gieson posterior también puede extraer algo la tinción elástica.
Contratiña los portaobjetos en una solución de Van Gieson durante 1 minuto, asegurándote de que el volumen utilizado sea suficiente para cubrir completamente la sección de tejido de cada portaobjetos. A continuación, deje caer rápidamente etanol al 95% sobre las rodajas de tejido durante unos segundos para diferenciar bien cada sección de tejido.