Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 3:20 min. • April 30th, 2023
Los esferoides son cultivos in vitro de células autoagregadas para formar estructuras esféricas tridimensionales. Para propagar esferoides tumorales, comience con esferoides cultivados en una matriz extracelular adecuada, o MEC, contenida en una placa de cultivo.
Triture con una micropipeta para romper la ECM mecánicamente y aflojar los esferoides. Transfiera la mezcla de esferoide-ECM a un tubo de microcentrífuga.
Centrifugar a baja velocidad para peletizar los esferoides y separarlos de la ECM en el sobrenadante. Deseche el sobrenadante gastado que contiene ECM. Transfiera el tubo que contiene el gránulo esferoide sobre hielo para evitar la solidificación de ECM durante los pasos posteriores.
Complemente el pellet con ECM licuado fresco. Para el subcultivo, mezcle el contenido pipeteando hacia arriba y hacia abajo repetidamente para disociar las células esferoides y liberarlas en suspensión.
Siembre esta mezcla que contiene células formadoras de esferoides y ECM en una placa de cultivo fresca. La ECM se solidifica, lo que permite el atrapamiento de las células tumorales. Agrega el medio de cultivo deseado. Incubar para facilitar el crecimiento de las células atrapadas en nuevos esferoides.
Para fines de envío, transfiera la mezcla de esferoide-ECM a un matraz de cultivo. Permita que el ECM se solidifique y atrape los esferoides en su interior.
Llene el matraz con medios de crecimiento para evitar el cizallamiento celular y mantener la viabilidad de los esferoides. Transfiera el matraz a un paquete de envío.
Rompa mecánicamente la ECM con una pipeta P1000 y transfiérala a un tubo estéril de 1,5 milímetros. Centrifugar el tubo a 1.000 x g a 4 grados centígrados. Luego, retire todo el sobrenadante y coloque el tubo en hielo. Agregue de dos a cuatro veces el volumen de ECM nuevo al pellet y mezcle el contenido del tubo pipeteando hacia arriba y hacia abajo 10 veces, asegurándose de evitar la introducción de burbujas de aire.
Transfiera de 5 a 20 microlitros de ECM en la mezcla SBNET a una nueva placa de 96 pocillos y deje que el ECM se solidifique. Luego, cubra el ECM solidificado con un nuevo medio SBNET y coloque la placa en la incubadora. Si envía esferoides SBNET a otro laboratorio, transfiera los esferoides con el nuevo ECM a un matraz T25 y permita que el ECM se solidifique. Llene el matraz con medio esferoide SBNET, enrosque bien la tapa y prepare el paquete de envío.