División de esferoides para subcultivo y envío: un procedimiento para propagar y transferir esferoides de un tumor neuroendocrino del intestino delgado

Los esferoides son cultivos in vitro de células autoagregadas para formar estructuras esféricas tridimensionales. Para propagar esferoides tumorales, comience con esferoides cultivados en una matriz extracelular adecuada, o MEC, contenida en una placa de cultivo.

Triture con una micropipeta para romper la ECM mecánicamente y aflojar los esferoides. Transfiera la mezcla de esferoide-ECM a un tubo de microcentrífuga.

Centrifugar a baja velocidad para peletizar los esferoides y separarlos de la ECM en el sobrenadante. Deseche el sobrenadante gastado que contiene ECM. Transfiera el tubo que contiene el gránulo esferoide sobre hielo para evitar la solidificación de ECM durante los pasos posteriores.

Complemente el pellet con ECM licuado fresco. Para el subcultivo, mezcle el contenido pipeteando hacia arriba y hacia abajo repetidamente para disociar las células esferoides y liberarlas en suspensión.

Siembre esta mezcla que contiene células formadoras de esferoides y ECM en una placa de cultivo fresca. La ECM se solidifica, lo que permite el atrapamiento de las células tumorales. Agrega el medio de cultivo deseado. Incubar para facilitar el crecimiento de las células atrapadas en nuevos e