Microscopía de fluorescencia de trampas extracelulares de neutrófilos o NETs: una técnica para observar la interacción adhesiva entre las células cancerosas y los NETs

En condiciones patológicas como el cáncer, los neutrófilos activados liberan trampas extracelulares de neutrófilos o NET, una malla de ADN extracelular con enzimas asociadas y proteínas antimicrobianas, que atrapan las células cancerosas circulantes.

Para visualizar la interacción adhesiva entre los NET y las células tumorales in vitro, comience cultivando neutrófilos de baja densidad, un subtipo de neutrófilos, en una placa de cultivo recubierta de polímero que promueve la unión celular. Incube durante unas horas para estimular a los neutrófilos para que formen NET en forma de red.

Agregue una suspensión de células cancerosas marcadas con fluoresceína roja al cultivo de neutrófilos. Incubar las células cancerosas con NET durante un breve período para facilitar la interacción entre las células cancerosas y las NET. El NET-DNA actúa como un factor quimiotáctico que atrae a las células cancerosas y promueve su adhesión a los NET.

Retire el medio gastado. Lave suavemente el cultivo con un medio fresco adecuado para eliminar bien cualquier célula tumoral no adherida del cultivo.

Ahora, agregue una tinción nuclear fluorescente verde impermeable a la membrana para colorear los NET extrac