Microscopía de fluorescencia de lapso de tiempo de trampas extracelulares de neutrófilos o NET: una técnica para analizar la interacción posterior a la adhesión entre las células cancerosas y los NET

Durante condiciones patológicas como el cáncer, los neutrófilos activados liberan trampas extracelulares de neutrófilos o NET, una red de fibras de ADN extracelulares asociadas con histonas y enzimas proteolíticas. Estas estructuras atrapan las células cancerosas y desempeñan un papel clave en la metástasis del cáncer.

Para estudiar el comportamiento posterior a la adhesión de las células cancerosas atrapadas en NET in vitro, primero, cultivar neutrófilos de baja densidad, una subpoblación de neutrófilos, en una placa de cultivo recubierta de polímero que facilita la unión celular. Incubar para activar los neutrófilos para liberar NET en forma de malla.

A continuación, agregue un tinte nuclear fluorescente verde impermeable a la membrana para teñir las fibras de ADN en los NET específicamente. Retire el medio gastado. Agregue una suspensión de células cancerosas al cultivo de neutrófilos.

Incubar el cultivo durante un período corto para facilitar la interacción entre las células cancerosas y la red. El componente de ADN de los NET funciona como un factor quimiotáctico que estimula la migración de las células cancerosas y ayuda a su adhesión a los NET.

Retire el medio gastado. Enjua