Preparación de bloques de exosomas: un protocolo para preservar exosomas de células de cáncer de colon humano cultivadas

Los exosomas son las estructuras vesiculares extracelulares secretadas por las células cultivadas en el sobrenadante. Para preparar un bloque de exosomas, comience tomando un sobrenadante de cultivo que contenga exosomas en un tubo. Centrifugar el tubo a alta velocidad para peletizar los exosomas intactos. Deseche el sobrenadante restante.

Tratar el gránulo del exosoma con glutaraldehído presente en el tampón de fijación. Incube la mezcla en hielo durante el tiempo deseado para preservar la morfología de los exosomas. El glutaraldehído se infiltra en los exosomas y reticula las proteínas. El tampón de fijación mantiene los exosomas a pH neutro para el proceso de fijación posterior.

Deseche el tampón que contiene glutaraldehído y agregue una solución de tetróxido de osmio, un fijador secundario que permeabiliza la bicapa de la membrana y fija los lípidos presentes en los exosomas. Retire la solución de tetróxido de osmio y trate los exosomas con una serie de concentraciones crecientes de acetona. Este proceso deshidrata los exosomas.

Reemplace la acetona absoluta con la mezcla de acetona media de inclusión. Gradualmente, aumente la proporción de medio de inclusión en esta mezcla.

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