Seccionamiento, tinción e imágenes TEM de exosomas incrustados: un protocolo para visualizar las características estructurales de los exosomas mediante TEM

0 views • 2:32 min • April 30th, 2023

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Los exosomas son vesículas esféricas de tamaño nanométrico encerradas por una bicapa lipídica que contiene moléculas de ADN, ARN y proteínas presentes dentro de la luz.

Para visualizar la estructura del exosoma mediante microscopía electrónica de transmisión, o TEM, comience tomando un bloque de exosomas, un bloque de matriz sólida que contiene los exosomas incrustados. Usando un ultramicrotomo, obtenga secciones ultrafinas del bloque de exosomas.

Recoja la sección del exosoma en una rejilla adecuada y deje que se adhiera a la superficie. La rejilla proporciona un soporte estable a la muestra del exosoma para los pasos posteriores de tinción.

A continuación, coloque la rejilla sobre una gota de acetato de uranilo, una mancha de metal pesado, e incube durante el tiempo deseado. Los iones de uranilo interactúan con lípidos, proteínas, ADN y ARN presentes en los exosomas.

Posteriormente, tiña la sección del exosoma con citrato de plomo, que también se une a las biomoléculas exosomales. El citrato de plomo se une débilmente a los iones de uranilo preunidos y mejora el contraste con el fondo durante la obtención de imágenes.

Observe los exosomas doblemente teñidos usando TEM. TEM enfoca el haz de electrones en la muestra de exosoma. Las regiones teñidas en el exosoma dispersan los electrones con más fuerza en comparación con las regiones no teñidas.

La apertura del objetivo filtra estos electrones altamente dispersos. Por lo tanto, los exosomas que contienen biomoléculas teñidas aparecen más oscuros que el fondo.

Con un ultramicrotomo, prepare secciones con un grosor de 60 nanómetros. Coloque las secciones en una rejilla de níquel y tiñe dos veces algunas de ellas con acetato de uranilo al 2% durante 20 minutos, seguido de citrato de plomo durante 10 minutos. A continuación, coloque la sección teñida en un microscopio electrónico de transmisión y vea la muestra usando 80 kV y siga la configuración automática para el tiempo de exposición. Con una imagen de exosoma a la vista, adquiera y guarde la imagen utilizando el software del microscopio.

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Un método para la obtención de secciones seriadas ultrafinas de microorganismos en microscopía electrónica de transmisión

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Last updated: 11 July 2026