Seccionamiento, tinción e imágenes TEM de exosomas incrustados: un protocolo para visualizar las características estructurales de los exosomas mediante TEM

Los exosomas son vesículas esféricas de tamaño nanométrico encerradas por una bicapa lipídica que contiene moléculas de ADN, ARN y proteínas presentes dentro de la luz.

Para visualizar la estructura del exosoma mediante microscopía electrónica de transmisión, o TEM, comience tomando un bloque de exosomas, un bloque de matriz sólida que contiene los exosomas incrustados. Usando un ultramicrotomo, obtenga secciones ultrafinas del bloque de exosomas.

Recoja la sección del exosoma en una rejilla adecuada y deje que se adhiera a la superficie. La rejilla proporciona un soporte estable a la muestra del exosoma para los pasos posteriores de tinción.

A continuación, coloque la rejilla sobre una gota de acetato de uranilo, una mancha de metal pesado, e incube durante el tiempo deseado. Los iones de uranilo interactúan con lípidos, proteínas, ADN y ARN presentes en los exosomas.

Posteriormente, tiña la sección del exosoma con citrato de plomo, que también se une a las biomoléculas exosomales. El citrato de plomo se une débilmente a los iones de uranilo preunidos y mejora el contraste con el fondo durante la obtención de imágenes.

Observe los exosomas doblemente teñidos usando TEM. TEM enfoca