Congelación rápida de tejido muscular para seccionamiento: un protocolo para obtener secciones ultrafinas de tejido muscular murino congelado rápidamente
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 3:30 min. • April 30th, 2023
La congelación instantánea es una técnica mediante la cual las muestras de tejido se congelan rápidamente a temperaturas ultrafrías. Ayuda a retener la estructura nativa del ADN, el ARN y las proteínas dentro del tejido.
Para congelar el músculo de la extremidad, comience tomando tejido muscular recién extraído de la extremidad posterior de un ratón.
A continuación, tome nitrógeno líquido en una caja de espuma de poliestireno y sumerja un vaso de precipitados que contenga isopentano, un líquido altamente conductor, en nitrógeno líquido.
Congele el isopentano hasta que la solución se vuelva viscosa. Simultáneamente, aplique una gota de medio líquido de congelación sobre una pieza de corcho.
Coloque el tejido muscular de las extremidades posteriores sosteniendo su tendón e incruste la pieza de tejido verticalmente en el medio de congelación líquido. Esta orientación ayuda en la determinación posterior del área de la sección transversal del músculo.
Sumerja brevemente la pieza de corcho con el tejido muscular adherido en el baño de isopentano preenfriado. Esto ayuda a la congelación rápida y uniforme del tejido muscular.
El medio de congelación se solidifica a baja temperatura y forma
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