Aislamiento de células mononucleares Lamina Propria: una técnica de centrifugación en gradiente de densidad basada en sílice para obtener células mononucleares a partir del colon murino
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 5:01 min. • April 30th, 2023
La lámina propia intestinal, ubicada debajo del epitelio intestinal, consiste en tejido conectivo suelto junto con una densa red de fibras de colágeno que contienen una amplia gama de células como fibroblastos, células mononucleares, incluidos linfocitos y monocitos. Estas células juegan un papel crucial en el mantenimiento de la homeostasis.
Para aislar células mononucleares, comience tomando fragmentos de colon de ratón. Trate los fragmentos con un tampón de digestión que contenga enzimas colagenasa. Las enzimas colagenasas digieren las fibras de colágeno dentro del tejido, liberando las células en suspensión.
Recoja el sobrenadante y fíltrelo a través de filtros celulares para eliminar el tejido no digerido y los desechos y obtener una suspensión unicelular. Agregue un tampón frío al filtrado para inactivar las enzimas colagenasa.
Centrifugar para separar las células. Deseche el sobrenadante que contiene las enzimas y vuelva a suspender el sedimento celular en un medio de separación a base de sílice de baja densidad. A continuación, coloque la suspensión sobre un medio de separación a base de sílice de alta densidad para crear un gradiente de separación.
Centrifugar la mezcla. L
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