Aislamiento de glándulas gúntricas gúntricas: un método para aislar glándulas fúndicas del tejido estomacal humano

En los humanos, el fondo de ojo es la parte superior del estómago. El epitelio fúndico consta de numerosas glándulas gástricas que secretan jugo gástrico, lo que ayuda en la digestión.

Para aislar las glándulas fúngicas gástricas, comience tomando tejido fúndico humano en un vaso de precipitados. Agregue un tampón adecuado al vaso de precipitados y lave vigorosamente el tejido fúndico. El lavado elimina los desechos contaminantes y la sangre del tejido fúndico.

Transfiera el tejido limpio a una placa de Petri. Con una gasa estéril, limpie la capa mucosa protectora, exponiendo así la capa epitelial subyacente. Con fórceps, raspe con fuerza la capa epitelial superior del tejido.

Transfiera el epitelio raspado a otra placa de Petri y píquelo en trozos más pequeños. Agregue los trozos picados a un matraz que contenga un tampón complementado con enzimas colagenasa. Incubar a la temperatura deseada con agitación constante para evitar la formación de grumos.

La colagenasa digiere las proteínas de la matriz extracelular presentes en la capa epitelial, liberando las glándulas fúngicas disociadas en suspensión. Filtra la suspensión en un tubo nuevo para eliminar los grumos no disociados.

Mantenga el filtrado glandular intacto sobre el hielo para sedimentar las glándulas. Deseche el sobrenadante que contiene restos celulares y vuelva a suspender el sedimento glandular en un tampón nuevo. Centrifugar y almacenar el pellet glandular hasta su uso posterior.

Para comenzar, recoja el tejido preparado en un recipiente de plástico grande lleno de DPBS sin calcio / magnesio. Deje el recipiente de plástico en hielo hasta su uso. A continuación, con la ayuda de fórceps, lave el tejido vigorosamente en un vaso de precipitados estéril, que contenga 100 mililitros de DPBS sin calcio / magnesio, durante unos 30 segundos. Luego, use una gasa estéril para limpiar la capa de moco del epitelio.

Luego, use fórceps grandes para sujetar firmemente la capa muscular del tejido. Luego, use pinzas hemostáticas curvas grandes y raspe el epitelio con fuerza. Guarde el epitelio raspado en una placa de Petri de poliestireno estéril. Para optimizar la digestión del tejido, pique el tejido epitelial en fragmentos. Luego, lave el tejido con DPBS sin calcio / magnesio complementado con antibióticos.

Lávese varias veces para eliminar la sangre. Deseche el lavado en un vaso de precipitados de desechos. Luego, recoja los fragmentos epiteliales lavados en un matraz de fondo redondo de vidrio de 125 mililitros con una barra de agitación de 25 mililitros y un medio de incubación precalentado. Después de recoger los fragmentos de tejido, selle el matraz de fondo redondo con un tabique de goma. Luego, inserte una aguja espinal de 20G en los tabiques. Conecte los septos a un tanque de oxígeno con manguera de goma.

Inserte de 10 a 15 agujas de salida en los septos para evitar su ruptura y luego use abrazaderas para asegurar la configuración a un soporte de anillo. Luego, encienda el flujo de salida de oxígeno en bajo. Después de esto, calibre el baño de agua a 37 grados centígrados en una placa agitadora durante 30 a 45 minutos. Una vez calibrado, coloque la configuración en el baño de agua. Después de 15 minutos de incubación, verifique si hay glándulas disociadas.

Después del tiempo de incubación deseado, agregue 50 mililitros de DMEM/F-12 precalentado al medio de incubación con una pipeta serológica. A continuación, filtrar la mezcla de glándulas obtenida a través de una gasa estéril en cuatro tubos cónicos de 50 mililitros. Luego, incube el filtrado en hielo durante 15 minutos. Esto permitirá que la glándula se asiente en el fondo del tubo cónico. Use una pipeta serológica para desechar 40 mililitros del sobrenadante de la parte superior de la suspensión de la glándula.

Vuelva a suspender los 10 mililitros restantes de la mezcla de glándulas en 10 mililitros de DPBS suplementados con antibióticos. Luego, distribuya toda la mezcla en tubos de ensayo de cultivo celular de 5 mililitros. Centrifugar los tubos a 65 x g durante 5 minutos a 4 grados centígrados. Después de la centrifugación, retire con cuidado el sobrenadante.