Aislamiento de colonias de células cancerosas metastásicas a partir de CAM de pollo: un procedimiento para aislar células cancerosas a partir de cultivos de óvulos sin cáscara
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 3:40 min. • April 30th, 2023
La membrana corioalantoidea de pollo o CAM es una membrana de tres capas ubicada justo debajo de la cáscara del huevo. Consiste en un ectodermo externo, un mesodermo altamente vascular y el endodermo más interno.
El mesodermo CAM se compone de vasos sanguíneos, fibroblastos y componentes estromales y, por lo tanto, proporciona un entorno favorable para la colonización de células tumorales.
Para aislar las células cancerosas colonizadas de la CAM, comience tomando un cultivo de óvulos sin cáscara preinyectado con células cancerosas marcadas con fluorescencia en un plato. Visualice el cultivo de huevos bajo un microscopio de fluorescencia. Localizar las colonias de cáncer metastásico fluorescentes y compactas.
Extirpe suavemente el tejido CAM que contiene colonias metastásicas de interés. Transfiera el tejido CAM extirpado a un tubo de microcentrífuga. Pica el tejido en trozos pequeños para que la CAM sea accesible al tratamiento enzimático en los pasos posteriores.
Complemente el tubo con enzima colagenasa e incube. La colagenasa degrada la proteína de colágeno en el mesodermo CAM e inicia la disociación de las colonias cancerosas. Centrifugar la suspensión para granular las células
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