Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 3:53 min. • April 30th, 2023
El pretratamiento de secciones de tejido fijadas en formol e incluidas en parafina o FFPE facilita la exposición de ácidos nucleicos y permite la unión de sondas marcadas a la secuencia diana durante la hibridación in situ posterior. Además, el pretratamiento ayuda a mantener la integridad de los ácidos nucleicos dentro de las células y la morfología general del tejido.
Para comenzar, tome un portaobjetos de vidrio que lleve una sección de tejido FFPE desparafinado y rehidratado de interés. Tratar el tejido con una concentración adecuada de peróxido de hidrógeno e incubar.
El peróxido de hidrógeno inactiva irreversiblemente la peroxidasa endógena, que está fisiológicamente presente en las células. Este proceso de bloqueo elimina la posibilidad de señales de fondo no específicas durante los pasos de hibridación posteriores.
A continuación, sumerja la sección de tejido en un baño caliente que contenga un tampón de recuperación de antígenos adecuado. Incubar durante el tiempo deseado. La alta temperatura escinde los enlaces cruzados químicos inducidos por fijadores en proteínas y ácidos nucleicos, exponiendo los epítopos desenmascarados a sondas durante el etiquetado posterior.
Finalm
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