Hibridación de sonda y amplificación de señal en ARN Hibridación in situ: una técnica para detectar secuencias específicas de ARN en secciones de tejido

Para detectar una secuencia de ARN específica en una célula, comience tomando una sección de tejido en un portaobjetos de vidrio. Superponga la sección de tejido con un tampón de hibridación adecuado que contenga las sondas de ARN diana.

Estas sondas son moléculas de ARN en forma de Z que tienen una porción de reconocimiento de objetivos en un extremo y una secuencia de cola en el otro extremo. Un brazo espaciador une estos dos extremos.

Ahora, incube el portaobjetos en un horno de hibridación a una temperatura óptima. Las sondas de ARN en forma de Z ingresan a la célula y se hibridan con la secuencia de ARNm objetivo correspondiente en pares.

Retire el portaobjetos del horno. Sumerja el portaobjetos en una solución de lavado para eliminar las sondas sueltas y el exceso de tampón de hibridación.

A continuación, agregue una solución de preamplificador e incube. La molécula preamplificadora se une a la secuencia de cola de dos sondas Z adyacentes. Esta molécula no se une a una sola sonda Z, lo que garantiza la especificidad.

A continuación, agregue la mezcla de reactivos amplificadores e incube. Múltiples moléculas amplificadoras se hibridan en la secuencia de preamplificador única.