JoVE Encyclopedia of Experiments
Investigación sobre el cáncer
0 vistas • 2:24 min • April 30th, 2023
La membrana corioalantoidea o CAM es una membrana extraembrionaria, que se adhiere estrechamente a la membrana interna de la cáscara de un huevo intacto. CAM es un sistema ideal para la implantación y modelado de tumores porque es una membrana naturalmente inmunodeficiente y altamente vascularizada.
Para cosechar una CAM portadora de tumores, primero tome un huevo de gallina fertilizado viable que tenga una CAM completamente desarrollada previamente trasplantada con un tumor. Agregue paraformaldehído a la CAM. El paraformaldehído reticula las proteínas de la membrana, lo que hace que la membrana sea más rígida para facilitar su recolección.
Luego, corte alrededor del huevo para separar la parte superior de la cáscara del huevo del resto del huevo, con el CAM portador del tumor aún adherido a la cáscara extraída. Sostenga y levante el CAM por un borde para separarlo suavemente de la cáscara del huevo.
A continuación, coloque el CAM recolectado en paraformaldehído con el injerto tumoral hacia arriba. El paraformaldehído preserva la morfología de la CAM y el injerto tumoral, preparando así la membrana recolectada para varios análisis posteriores.
Al final de la incubación, coloque los huevos en la mesa de laboratorio. Use una jeringa para perforar el apósito de película de cada huevo y aplique aproximadamente 300 microlitros de paraformaldehído al 4% sobre cada membrana corioalantoidea para endurecer ligeramente el tejido y facilitar el proceso de recolección.
Con unas tijeras, retire la mitad superior de la cáscara del huevo con la membrana corioalantoidea adherida. Reducir el tamaño de la cáscara a aproximadamente 3 centímetros de diámetro, manteniendo la porción de la membrana corioalantoidea donde se injertaron el ganglio de la raíz dorsal y las células tumorales dentro del centro del fragmento de la cáscara. Luego, agarre la membrana corioalantoidea con pinzas finas y separe el tejido de la cáscara del huevo para transferirlo a un pocillo de una placa de 6 pocillos que contenga 2 mililitros de paraformaldehído al 4% por pocillo.