JoVE Encyclopedia of Experiments
Investigación sobre el cáncer
0 vistas • 3:02 min • April 30th, 2023
La inoculación ortotópica facilita la administración de células cancerosas a un animal receptor en un órgano o sitio que coincide con el histotipo tisular. Para comenzar, prepare un ratón desnudo inmunocomprometido anestesiado en posición supina.
A continuación, haga una incisión quirúrgica en la región del cuello para revelar las glándulas salivales. Desplace las glándulas salivales y diseccione los músculos de la correa para exponer la tráquea subyacente y la glándula tiroides.
La glándula tiroides, una glándula endocrina, consta de dos lóbulos que se encuentran a cada lado de la tráquea y rodean el cartílago cricoides. Estos dos lóbulos están conectados por una delgada franja de tejido tiroideo llamada istmo.
Ahora, prepare una suspensión de células de cáncer de tiroides con un tampón adecuado en una jeringa. Inyecte con cuidado la suspensión celular en el lóbulo tiroideo del ratón.
Posteriormente, reposicionar las glándulas salivales y suturar la incisión. Deje que el mouse se recupere. Controle al ratón semanalmente para observar el crecimiento de tumores ortotópicos dentro del lóbulo tiroideo.
Para la inoculación ortotópica de células tumorales tiroideas, suspenda una alícuota de células Cal62 en 5 microlitros de PBS e inyecte por vía subcutánea 100 microlitros de analgésico y 100 microlitros de antibiótico en un ratón desnudo BALB/c de 7 semanas de edad. Después de confirmar una falta de respuesta al pellizco del dedo del pie, coloque al animal bajo un microscopio de disección y desinfecte el cuello del animal con yodopovidona.
A continuación, haga una incisión de aproximadamente 2 centímetros en la piel y desplace las glándulas salivales para exponer el cuello. Use fórceps de disección y / o tijeras para diseccionar los músculos de la correa para exponer la tráquea y la glándula tiroides, y use una jeringa de 10 microlitros para inyectar el volumen de 5 microlitros de células tumorales en el lóbulo tiroideo derecho, ubicado al costado del cartílago cricoides.
Cuando se hayan entregado todas las células, vuelva a colocar las glándulas salivales y use suturas trenzadas de seda, recubiertas y no absorbibles para cerrar la incisión. Luego, aplique yodopovidona en el área de la herida y coloque al ratón sobre una manta térmica con monitoreo hasta la recuperación completa.