Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 2:22 min. • April 30th, 2023
La molienda criogénica o criomolienda es una técnica que permite enfriar muestras de tejido descelularizado a temperaturas extremadamente bajas y molerlas hasta obtener un polvo fino mientras conservan su composición bioquímica.
Para comenzar, obtenga una matriz extracelular descelularizada derivada de tejido liofilizado o ECM de interés. Picarlo para obtener pequeños fragmentos.
A continuación, transfiera los fragmentos de ECM picados a un frasco de molienda. Introduce las bolas de molienda en el frasco de molienda. Sumerja el frasco de molienda cargado en nitrógeno líquido para congelar la muestra a -196 °C.
Cargue el frasco enfriado en un sistema de criomolienda. Someter la muestra congelada a criomolienda con una frecuencia adecuada durante el tiempo deseado.
Durante la criomolienda, el frasco de molienda oscila radialmente en posición horizontal. En consecuencia, la inercia de las bolas de molienda les facilita impactar la muestra congelada con alta energía en los extremos redondeados del frasco y pulverizarla.
Además, el movimiento del recipiente de molienda junto con el movimiento de las bolas de molienda promueve la mezcla intensiva de la muestra para obtener un polvo fino con una distribución uniforme del tamaño de partícula.
Ahora, transfiera el polvo ECM criomolido a un vial de vidrio. Selle el vial herméticamente para evitar la exposición a la humedad. Desecar la muestra hasta su uso posterior.
Use tijeras quirúrgicas afiladas para picar finamente el tejido descelularizado. Para criolimar el tejido procesado, llene una cámara de molienda de acero inoxidable de 25 mililitros para un sistema de molino de bolas de laboratorio con ECM liofilizado picado y agregue dos bolas de molienda de acero inoxidable de 10 milímetros.
Cierre y sumerja completamente la cámara de molienda cargada en nitrógeno líquido durante 3 minutos. Luego, muele la muestra congelada a 30 hercios durante 3 minutos. Repita la inmersión en nitrógeno líquido y la molienda hasta que el ECM se muela hasta obtener un polvo fino.