Preparación de suspensiones de ECM: una técnica para obtener una suspensión homogénea a partir de una matriz extracelular derivada de tejidos

La matriz extracelular o ECM, una red de soporte compleja en los tejidos, consta de proteoglicanos y proteínas.

Para obtener ECM homogeneizado, comience tomando una cantidad medida de polvo ECM descelularizado en un tubo. Ahora, agregue un tampón acidificado al tubo para formar una suspensión ECM.

Simultáneamente, en otro tubo, disuelva la alfa-amilasa, una enzima glucolítica, en el mismo tampón acidificado. El pH ácido de este tampón facilita la actividad óptima de la enzima alfa-amilasa.

A continuación, complemente el tubo que contiene la suspensión de ECM con una solución de enzima alfa-amilasa. Incube el tubo con agitación constante. La alfa-amilasa hidroliza los glicanos, los restos de carbohidratos, presentes en los proteoglicanos.

Centrifugar para granular la fracción ECM rica en proteínas, dejando los glicanos digeridos y las enzimas gastadas en el sobrenadante. Deseche el sobrenadante.

Vuelva a suspender el gránulo en una solución de cloruro de sodio. Los iones de cloruro extraen las proteínas del gránulo de ECM en la suspensión. Centrifugar y desechar el sobrenadante que contiene cloruro de sodio.

A continuación, agregue ácido acético al gránulo de ECM que contiene proteí