Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 2:31 min. • April 30th, 2023
Las espumas derivadas de ECM son andamios altamente porosos obtenidos utilizando la matriz extracelular, un componente no celular del microambiente tisular.
Para fabricar una espuma derivada de ECM, comience tomando una suspensión homogénea de polvo ECM ultrafino en un tubo. Incube la suspensión a una temperatura cálida con agitación constante para evitar la formación de grumos en la ECM.
A continuación, con una jeringa, transfiera la suspensión ECM licuada al molde deseado. Refrigere el molde durante la noche para que el ECM se solidifique. El ECM se solidifica para formar una estructura de red tridimensional.
Finalmente, coloque el molde sólido que contiene ECM en un matraz liofilizador. Conecte el matraz a un sistema de liofilización. Dentro del liofilizador, la muestra se somete a una temperatura ultrafría y baja presión. Esto da como resultado la formación de cristales de hielo en los espacios intersticiales de la red ECM.
A su debido tiempo, la presión y la temperatura del liofilizador aumentan gradualmente. Estas condiciones facilitan la sublimación, un proceso en el que el sólido se convierte directamente a su forma gaseosa en lugar de fundirse.
Los vapores gaseosos se evaporan, dejando espacios vacíos dentro de la red ECM, generando así un andamio poroso derivado de ECM.
Incube la suspensión ECM a 37 grados Celsius con agitación continua a 120 rpm hasta que la suspensión esté caliente. A continuación, utilice ácido acético 0,2 molar para diluir la suspensión de la muestra a la concentración deseada. Con la jeringa de 3 mililitros y una aguja de 18G, llene el molde deseado con la suspensión ECM.
Las espumas se pueden fabricar en una variedad de geometrías dependiendo de la forma del molde. Cubra y congele los moldes a menos 20 o menos 80 grados centígrados. Luego, coloque los moldes en un matraz liofilizador. Conecte el matraz al sistema de liofilización de laboratorio y seque los moldes durante 24 horas o hasta que estén completamente secos.