Fabricación de bioandamios por electropulverización: una técnica para generar andamios de microportadores derivados de la matriz extracelular de tejido descelularizado

Los microportadores son matrices de soporte esféricas de tamaño micrométrico con poros interconectados que proporcionan una superficie expansiva para la unión y el crecimiento celular.

Para fabricar matriz extracelular o microportadores derivados de ECM, comience con una suspensión uniforme de ECM finamente pulverizada. Cargue la suspensión en una jeringa conectada a un equipo de infusión. Asegure la jeringa en una bomba de jeringa. Coloque la aguja verticalmente sobre un matraz criogénico a una distancia adecuada.

Ahora, conecte la aguja al terminal positivo de una fuente de alimentación de alto voltaje. Coloque una tira de papel de aluminio doblada sobre el borde del matraz y conéctela al terminal de conexión a tierra para completar el circuito.

A continuación, llene el nitrógeno líquido en el matraz con el extremo interior de la tira de aluminio sumergido. Aplique el voltaje deseado y ajuste la bomba de jeringa a un caudal adecuado para iniciar la electropulverización. A medida que la suspensión ECM conductora emerge de la punta de la aguja, su forma se deforma bajo la influencia del campo eléctrico y la tensión superficial, formando un cono líquido puntiagudo.

Con incrementos de voltaje, la suspensión sale disparada. Esto eventualmente se rompe en gotas más pequeñas cargadas y cae en el baño de nitrógeno líquido. El nitrógeno líquido congela instantáneamente las microgotas, cristalizando las partículas de solvente en su interior.

Transfiera las microgotas congeladas a un tubo nuevo. Liofilizar la muestra. Este paso ayuda a eliminar las partículas de disolvente congeladas de la muestra, generando poros en su lugar. Almacene el polvo seco de microportadores porosos para futuras aplicaciones.

Incube la suspensión de ECM criomolida con agitación continua a 100 rpm durante la noche. Cargue 3 mililitros de suspensión ECM en una jeringa Luer-Lock de 3 mililitros y coloque un equipo de infusión alado en el orificio de la jeringa. Asegure la jeringa dentro de la bomba de jeringa. Luego, sujete la aguja a un soporte de retorta y coloque la punta de la aguja verticalmente a una distancia de 4 a 6 centímetros de la parte superior de un matraz Dewar de forma baja.

A continuación, coloque un electrodo de pinza de cocodrilo en la punta de la aguja, asegurándose también de que la pinza de cocodrilo esté conectada al terminal positivo de la fuente de alimentación de alto voltaje. Dobla la tira de papel de aluminio sobre el borde del matraz de vacío. Luego, coloque un segundo electrodo de pinza de cocodrilo en el borde exterior de la lámina. Conéctelo al terminal de fuente de tierra de la fuente de alimentación.

Llene el matraz Dewar con nitrógeno líquido hasta aproximadamente 1 centímetro de la parte superior para que tres cuartas partes de la lámina queden sumergidas. Luego, configure la bomba de jeringa a una velocidad de infusión de 30 mililitros por hora y rocíe las muestras de acuerdo con el protocolo de texto. Una vez que se complete la infusión, vierta con cuidado el exceso de nitrógeno líquido del Dewar, dejando el microportador suspendido en aproximadamente 25 mililitros de nitrógeno líquido para asegurarse de que permanezcan congelados.

Transfiera inmediatamente los microportadores con nitrógeno líquido a un tubo de centrífuga de 50 mililitros vertiéndolos con un movimiento suave. Luego, usa una cuchara para recolectar los microportadores congelados que queden en el Dewar. Agréguelos al tubo de centrífuga. Para prepararse para la liofilización, cubra el tubo de la centrífuga con papel de aluminio perforado con pequeños agujeros. Coloque los tubos de centrífuga cubiertos en un matraz liofilizador. Luego, conecte inmediatamente el matraz al liofilizador y seque las muestras durante la noche.