Preparación de andamio esofágico porcino descelularizado: una técnica para generar andamio acelular a partir de un esófago de cerdo

Los andamios descelularizados derivados de la matriz extracelular de un tejido específico imitan su microambiente extracelular nativo. Estos andamios conservan su integridad estructural y composición bioquímica y sirven como plataformas prometedoras para la ingeniería de tejidos.

Para preparar un andamio esofágico porcino descelularizado, comience con un esófago porcino recién extirpado. Divida el esófago longitudinalmente y enjuáguelo con un tampón adecuado para eliminar cualquier residuo. A continuación, asegure el esófago con su superficie mucosa, la capa más interna, hacia arriba.

Separe la mucosa de la submucosa subyacente en un extremo del esófago. Diseccionar el esófago longitudinalmente a lo largo del tejido conectivo suelto de la mucosa llamada lámina propia para separar completamente la superficie de la mucosa de la submucosa subyacente.

Además, extirpe las regiones proximal y distal de la mucosa, que contienen una mayor densidad de glándulas submucosas y una capa de lámina propia más gruesa. Corta el tejido mucoso en trozos de tamaño uniforme.

Trate el tejido con una solución salina hipertónica suplementada con antibióticos. Los antibióticos ayudan a prevenir el crecimiento bacteriano. A alta concentración de soluto, el agua sale de las células y provoca su contracción. Este paso ayuda aún más en la muerte celular y el desprendimiento de la matriz extracelular.

Ahora, separe suavemente el epitelio suelto del tejido subyacente. Enjuague el tejido con tampón para eliminar los desechos celulares. Finalmente, incube el tejido en glicerol, lo que facilita aún más la descelularización del tejido al deshidratar y lisar las células mientras preserva la integridad de la membrana basal.

Para preparar los andamios esofágicos de cerdo descelularizados, comience usando tijeras y un par de pinzas para abrir el esófago de un cerdo longitudinalmente. Luego, lave el esófago en una olla estéril de 180 mililitros que contenga 100 mililitros de PBS estéril durante 10 minutos agitando suavemente para eliminar cualquier residuo.

Mientras se enjuaga el pañuelo, rocíe una tabla de disección de corcho con etanol al 70%. Cuando el corcho esté seco, sujete el esófago a la tabla con la mucosa hacia arriba. Ahora, use pinzas estériles para agarrar la superficie de la mucosa en un extremo del esófago y retire el tejido de la tabla para separar la mucosa de la submucosa subyacente.

Luego, con una hoja de bisturí estéril, disecciona el esófago longitudinalmente a lo largo de la lámina propia, quitando los clavos a medida que avanza la disección para permitir que se levante la mucosa. Deseche la submucosa subyacente y use un bisturí para cortar la mucosa restante en trozos cuadrados de 5 centímetros. Lave las piezas en 150 mililitros de PBS estéril con agitación suave como se acaba de demostrar.

Después de cinco minutos, transfiera el tejido a un bote de 180 mililitros que contenga 150 mililitros de solución de cloruro de sodio 1 molar suplementada con antibióticos a 37 grados Celsius. Después de 72 horas, transfiera el tejido a 150 mililitros de PBS estéril, momento en el que el epitelio habrá comenzado a separarse visiblemente del tejido subyacente.

Use fórceps estériles y una hoja de bisturí para eliminar el epitelio desprendido y coloque el tejido restante en una olla nueva de 150 mililitros de PBS estéril con tres lavados de cinco minutos con agitación suave. El tejido ahora debe almacenarse en glicerol durante un mínimo de cuatro meses para esterilizar completamente el andamio.