Inyección quirúrgica de cisterna magna: un método para administrar células tumorales directamente en el sistema nervioso central de un modelo murino

El cerebro murino está revestido por tres capas meníngeas: la membrana dural más externa, la membrana aracnoidea media y la membrana pia más interna.

En la región posterior del cerebro, la membrana aracnoidea y pia están intervenidas por un espacio subaracnoideo cefalorraquídeo o lleno de LCR, llamado cisterna magna.

Para realizar la inyección intracisternal de las células tumorales, comience tomando un modelo de ratón anestesiado. Prepara el ratón quitando el pelo de la superficie ventral de la cabeza.

Ahora, coloque el mouse en posición prona y coloque su cabeza en un marco estereotáxico. Coloque la nariz del ratón, apuntándola ligeramente hacia abajo para nivelar la columna vertebral con la cisterna magna.

Con unas tijeras, haga una pequeña incisión en la línea media en el extremo posterior del cerebro, a la altura de las orejas.

Aparta con cuidado la capa muscular superficial. La cisterna magna se puede visualizar como un triángulo invertido cubierto por la membrana dural transparente.

A continuación, tome una jeringa que contenga suspensión de células tumorales circulantes.

Manteniendo la musculatura circundante retraída, inserte la jeringa debajo de la duramadre, perforando la membrana aracnoidea. Este paso permite la inyección de células tumorales directamente en el LCR presente en la cisterna magna.

Finalmente, cierre el sitio de la incisión aplicando clips para heridas y deje que el ratón se recupere.

Comience inyectando al ratón por vía subcutánea 1 miligramo por kilogramo de buprenorfina de liberación sostenida. Después de anestesiar al ratón, prepárelo para la cirugía. Corta el sitio quirúrgico con suficiente área de borde para evitar que el pelaje contamine el sitio de la incisión.

Afeitar el pelaje de toda la superficie de la cabeza y preparar la piel mediante técnica estéril. Luego, sature el sitio con un antiséptico germicida para la piel, trabajando desde el centro del sitio hacia la periferia, y deje que se seque.

Coloque el cuerpo para asegurarse de que la columna vertebral se mantenga nivelada con la cisterna magna. Mientras aplica una ligera tracción a la cola, coloque cinta adhesiva en la base de la cola para asegurarla.

Aplique un paño estéril o un material de paño de plástico estéril con respaldo adhesivo para proteger el sitio quirúrgico de la contaminación. Con el cuello en extensión completa, pase las puntas de las tijeras quirúrgicas hacia abajo con una ligera presión a través del hueso occipital comenzando justo entre las pinnas.

Haga una pequeña incisión en la línea media de 3 a 5 milímetros ligeramente por encima de la concavidad palpada. Extraiga 5 microlitros de la suspensión celular en una jeringa Hamilton de 30G. Use pinzas de punta roma con una punta de 1 a 2 milímetros para presionar suavemente la cisterna magna.

Introduce las puntas en posición cerrada y ábrelas mientras aplicas presión hacia abajo sobre la duramadre. Repita la disección roma hasta que la membrana dural se identifique fácilmente y los vasos sanguíneos asociados sean visibles en el área expuesta.

Mientras sostiene las pinzas, ábralas para retraer la musculatura circundante. Introduzca una aguja sin núcleo de 30G debajo de la duramadre para visualizar el bisel, asegurándose de que la aguja solo se introduzca un poco más allá del bisel.

Despliegue lentamente un émbolo de jeringa y administre las células justo debajo de la duramadre. Si se nota una fuga en el lugar de la inyección, aplique una presión suave con un aplicador con punta de algodón. Cierre la piel aplicando un clip para heridas o una microgota de adhesivo cutáneo.

Controle a los ratones diariamente después de la cirugía durante la primera semana. Si un ratón parece tener dolor o angustia, trátelo con una inyección subcutánea de 10 miligramos por kilogramo de carprofeno, una vez cada 12 a 24 horas durante un máximo de 5 días según la consulta y la directiva veterinaria.