Ensayo de fagocitosis microglial: un ensayo in vitro para establecer un modelo de fagocitosis microglial para células de neuroblastoma utilizando macrófagos iPSC
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 6:23 min. • April 30th, 2023
La microglía son macrófagos cerebrales que ayudan a eliminar patógenos, restos celulares y células nerviosas cancerosas o neuroblastoma mediante un proceso llamado fagocitosis.
Para imitar la fagocitosis in vitro, comience con un cultivo de células de neuroblastoma fijadas en paraformaldehído.
El paraformaldehído, un fijador químico, provoca la distribución aleatoria de fosfolípidos de membrana como la fosfatidilserina, lo que resulta en su translocación a la superficie externa de la membrana celular y, al mismo tiempo, estabiliza la estructura celular.
Ahora, agregue un tinte fluorescente reactivo a las aminas sensible al pH al cultivo celular de neuroblastoma e incube.
Las moléculas de colorante se unen a los grupos amina de la fosfatidilserina en la superficie celular del neuroblastoma.
Centrifugar el tubo y eliminar el sobrenadante que contiene moléculas de colorante no unidas. Enjuague el gránulo celular con un tampón adecuado y centrifuge.
Retire el sobrenadante y vuelva a suspender el gránulo en el medio de cultivo.
A continuación, siembre macrófagos preteñidos en una placa de cultivo. Los macrófagos teñidos aparecerán en rojo con un núcleo azul.
Agregue células de neuroblas
Vea la transcripción completa y acceda a miles de videos científicos