Purificación de núcleos basada en centrifugación en gradiente: una técnica para obtener una fracción ultrapura de núcleos intactos mediante centrifugación en gradiente de densidad

Para aislar y purificar núcleos intactos, comience tomando una fracción de núcleos crudos en un tubo. La fracción contiene núcleos intactos junto con fragmentos de núcleos rotos y escombros.

Mezcle esta fracción con un medio de gradiente de densidad adecuado de modo que forme una suspensión de la concentración más baja.

Ahora, coloque soluciones de densidades crecientes del mismo medio de gradiente debajo de la fracción de núcleos crudos preparados previamente para generar un gradiente de densidad discontinuo de varios pasos. Este paso permite que la fracción de núcleos crudos forme una banda en la parte superior del gradiente.

A continuación, centrifuga el tubo a baja velocidad.

Según las diferencias en forma y masa, los núcleos intactos migran de manera diferente en comparación con los escombros y los fragmentos nucleares. Esto da como resultado núcleos intactos que forman una banda separada.

Después de la centrifugación, ubique la banda distintiva que consta de núcleos intactos en la interfaz de las soluciones de gradiente de densidad.

Con una pipeta, aspire las capas superiores del gradiente para facilitar el acceso a la banda de núcleos puros. Recoja la banda que contiene los