JoVE Encyclopedia of Experiments
Investigación sobre el cáncer
0 vistas • 2:37 min • April 30th, 2023
Para criopreservar una muestra de cerebro murino mediante congelación instantánea, comience tomando un vaso lleno de solución de isopentano, un líquido altamente conductor, y sumérjalo en un frasco que contenga nitrógeno líquido.
Congele el isopentano hasta que la solución se vuelva viscosa.
Mientras tanto, tome una muestra de cerebro de ratón completo prefijada en solución de sacarosa. Este tratamiento previene la deformación del tejido cerebral en los pasos posteriores.
Retire la muestra de cerebro de la solución de sacarosa y séquela para eliminar cualquier rastro de sacarosa.
A continuación, coloque el cerebro en la orientación deseada en un criomold profundo que contenga una capa de medio de inclusión.
Superponga el cerebro en el criomold con más medios de incrustación para asegurarse de que todo el órgano esté cubierto.
Luego, sumerja el criomold que contiene el cerebro incrustado en el baño de isopentano preenfriado. El rápido enfriamiento del tejido cerebral a una temperatura ultrabaja asegura la retención de la arquitectura cerebral sin ninguna distorsión.
Ahora, deje que la muestra de cerebro se congele hasta que el medio de inclusión se solidifique formando una capa gelatinosa alrededor del cerebro, manteniéndolo en su lugar.
Una vez congelado, retire el criomold del baño de isopentano y envuelva el cerebro de ratón criopreservado en una hoja de aluminio.
Almacene la muestra a menos ochenta grados Celsius para un análisis histológico posterior.
Para prepararse para la criopreservación, llene un frasco con isopentano/2-metilbutano frío y coloque el frasco en un recipiente lleno de nitrógeno líquido. Mientras el solvente se enfría, seque el cerebro en un trozo de papel de filtro y colóquelo en un criomolde etiquetado.
Agregue con cuidado aproximadamente 5 mililitros de medio de corte a temperatura óptima al centro del criomold y coloque el cerebro en el molde en la orientación deseada. Con unas pinzas limpias, coloque rápidamente el criopol en el isopentano/2-metilbutano enfriado durante 30 a 40 segundos.
Una vez que el medio de corte se haya solidificado, transfiera el criomold a hielo seco y envuelva el criomold y el tejido cerebral congelado en papel de aluminio durante un almacenamiento de menos 80 grados Celsius.