JoVE Encyclopedia of Experiments
Investigación sobre el cáncer
0 vistas • 2:37 min • April 30th, 2023
Para obtener criosecciones o secciones delgadas de tejido congelado de un cerebro de ratón, primero, tome un bloque congelado de cerebro de ratón incrustado en un medio de inclusión adecuado.
Transfiera el bloque congelado a una cámara de criostato y deje que la temperatura del bloque se equilibre con la temperatura establecida del criostato para el procedimiento de corte posterior.
Luego, use un medio de inclusión para montar el bloque de tejido congelado en la base del disco de muestra de criostato.
Coloque el disco de muestra en la cabeza de la muestra del criostato.
Además, asegure una cuchilla en el soporte de la cuchilla del criostato.
Con el volante externo, ajuste la posición del cabezal de la muestra para alinear el bloque de tejido con la cuchilla.
Una vez que el bloque de tejido y la cuchilla estén correctamente orientados, mueva el volante para iniciar el corte, recortando la región no deseada del bloque de tejido que contiene un exceso de medio de inclusión.
A medida que el bloque de tejido congelado avanza hacia la cuchilla fija, se corta en rodajas del grosor deseado.
Transfiera con cuidado las secciones de tejido congelado en rodajas a portaobjetos de vidrio cargados positivamente. Los portaobjetos de vidrio cargados atraen electrostáticamente las secciones de tejido congelado, facilitando su adhesión a la superficie del portaobjetos.
Finalmente, almacene las secciones a bajas temperaturas hasta su posterior análisis.
Para adquirir secciones de tejido tumoral cerebral congelado, primero, ajuste la temperatura de un criostato entre menos 20 y menos 24 grados Celsius y coloque el bloque de muestra en la cámara de criostato durante 30 a 60 minutos.
Mientras la muestra se equilibra, limpie la cámara y el portacuchillas con etanol al 100% y rocíe los cepillos de sección con solución de limpieza de RNasa. Cuando la muestra esté lista, retire el molde y use un medio de corte nuevo para unir el bloque de tejido congelado al disco de muestra de criostato.
Coloque el bloque en el soporte del disco y alinee el bloque con la hoja del cuchillo. Adquiera secciones de 10 micrómetros del cerebro usando uno de los cepillos sin ARNasa para aplanar y desenrollar cuidadosamente las piezas de tejido sobre la superficie de corte.
Para montar las secciones de tejido cerebral en portaobjetos, presione suavemente el lado cargado positivamente de un portaobjetos de vidrio PEN sin ARNasa etiquetado en la sección y coloque el portaobjetos en una caja de almacenamiento dentro de la cámara. Cuando se hayan recogido todos los portaobjetos, coloque la caja de almacenamiento a menos 80 grados centígrados.