Fijación y tinción de secciones de tejido criopreservado: un procedimiento para procesar secciones de tejido cerebral congelado para la microdisección con láser

Para diferenciar poblaciones celulares específicas en un tejido tumoral cerebral de ratón heterogéneo para su posterior aislamiento, comience tomando un portaobjetos de vidrio que lleve la sección de tejido tumoral cerebral criopreservado de interés.

Incubar secuencialmente el tejido en concentraciones decrecientes de etanol. El etanol disuelve el medio de inclusión que ha penetrado en el tejido y lo fija mientras mantiene la integridad del ácido nucleico.

Además, el etanol rehidrata el tejido, lo que permite una tinción uniforme durante los pasos posteriores.

Ahora, trate el tejido con violeta de Cresyl. El violeta de cresil, un tinte básico, tiñe los componentes celulares ácidos, como los ácidos nucleicos.

A continuación, contratiña el tejido con eosina Y. La eosina Y, un colorante ácido, tiñe componentes celulares básicos como proteínas citoplasmáticas.

Este paso de tinción diferencial ayuda a distinguir entre el citoplasma y otras estructuras celulares, lo que permite la identificación de células de interés.

Después de la tinción, sumerja el tejido en concentraciones crecientes de etanol para deshidratar el tejido y evitar una distorsión excesiva del tejido.

A continuación, lav