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Para diferenciar poblaciones celulares específicas en un tejido tumoral cerebral de ratón heterogéneo para su posterior aislamiento, comience tomando un portaobjetos de vidrio que lleve la sección de tejido tumoral cerebral criopreservado de interés.
Incubar secuencialmente el tejido en concentraciones decrecientes de etanol. El etanol disuelve el medio de inclusión que ha penetrado en el tejido y lo fija mientras mantiene la integridad del ácido nucleico.
Además, el etanol rehidrata el tejido, lo que permite una tinción uniforme durante los pasos posteriores.
Ahora, trate el tejido con violeta de Cresyl. El violeta de cresil, un tinte básico, tiñe los componentes celulares ácidos, como los ácidos nucleicos.
A continuación, contratiña el tejido con eosina Y. La eosina Y, un colorante ácido, tiñe componentes celulares básicos como proteínas citoplasmáticas.
Este paso de tinción diferencial ayuda a distinguir entre el citoplasma y otras estructuras celulares, lo que permite la identificación de células de interés.
Después de la tinción, sumerja el tejido en concentraciones crecientes de etanol para deshidratar el tejido y evitar una distorsión excesiva del tejido.
A continuación, lave el pañuelo con xileno. El xileno desplaza y elimina el etanol de la sección de tejido.
Finalmente, agregue una solución de montaje adecuada en la sección de tejido para preservar la morfología del tejido.
La sección de tejido procesado está lista para ser utilizada para la microdisección láser, un proceso que permite el aislamiento preciso de células específicas del tejido.
Sumerja los portaobjetos en inmersiones secuenciales de etanol descendentes de 30 segundos, seguidas de tinción con solución de violeta cristalina durante 20 segundos y 5 segundos en solución de eosina Y al 0,5%.
Al final de la incubación de la eosina Y, use papel de filtro para secar los portaobjetos y deshidratar los portaobjetos en inmersiones secuenciales ascendentes de etanol. Después de la inmersión en etanol de 60 segundos, enjuague los portaobjetos en un recipiente con xileno durante 3 minutos.
A continuación, seque los portaobjetos sobre una superficie libre de ARNasa a temperatura ambiente durante 10 segundos antes de montar las muestras en un medio de montaje preparado con agua sin ARNasa. Después de 10 a 20 segundos, transfiera los portaobjetos a la plataforma de microdisección del microscopio.