Aislamiento basado en SEC de vesículas extracelulares derivadas de la microglía: una técnica para aislar vesículas extracelulares de medios de cultivo condicionados por la microglía

Las células microgliales liberan mediadores inmunológicos en forma de vesículas extracelulares o EV, incluidos cuerpos apoptóticos más grandes y vesículas de tamaño micro más pequeñas, en medios de crecimiento in vitro.

Para aislar los vehículos eléctricos, comience tomando medios acondicionados para la microglía. Este medio de cultivo contiene células microgliales junto con los VE liberados. Centrifugar el medio para peletizar las células.

Recoja el sobrenadante que contiene los EV, los desechos y los agregados de proteínas en un tubo nuevo. Centrifugue nuevamente para eliminar los desechos celulares y los cuerpos apoptóticos grandes.

Transfiera el sobrenadante a un tubo de ultracentrífuga. Centrífuga a alta velocidad.

Deseche el sobrenadante que contiene medios gastados y vuelva a suspender el EV y el gránulo de agregado de proteínas en el tampón deseado.

Al mismo tiempo, tome una columna de cromatografía de exclusión por tamaño con un filtro apropiado en su base.

Empaque herméticamente la columna con una matriz de filtración de gel que consta de perlas de gel esféricas que forman un tamiz poroso de tamaño de poro definido.

Cargue el EV y la suspensión de agregados de proteínas s