Extracción basada en SDS-PAGE de proteínas asociadas a vesículas extracelulares: un procedimiento para extraer proteínas de EV y prepararlas para la digestión en gel

Para comenzar, tome un tubo que contenga vesículas extracelulares intactas o EV.

Suspenda los EV en el volumen deseado de tampón de lisis y sonique la muestra. Este tratamiento lisa la membrana EV y corta el material genético, liberando las proteínas en el tampón.

Centrífuga para peletizar los restos celulares y el material genético cortado. Recoge el sobrenadante que contiene varias proteínas.

Agregue un colorante de carga al extracto de proteína y ejecútelo en un gel SDS-PAGE.

Remoje el gel en una solución de tinción para permitir que las moléculas de tinte se unan a las proteínas. Localice la banda teñida que contiene la proteína deseada y elimínela.

Corta la banda de color en trozos pequeños para mejorar la accesibilidad de las proteínas a las enzimas en los pasos posteriores. Transfiera estas piezas a un tubo de microcentrífuga.

Agregue una solución decolorante que elimine el tinte de tinción. Retire la solución decolorante gastada.

Agregue una solución de reducción. Incubar para permitir que el agente reductor escinda los enlaces disulfuro en la proteína, exponiendo los grupos sulfhidrilo libres.

Trate las proteínas reducidas con una solución alquilante. Los grupos alquilo se