Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 3:07 min. • April 30th, 2023
Las imágenes intravitales a través de ventanas de imágenes ópticas facilitan el seguimiento de alta resolución de células individuales para estudiar su comportamiento en el microambiente nativo en un animal vivo.
Para comenzar, tome un ratón anestesiado con su cerebro preinyectado con células cancerosas y con una ventana craneal implantada dentro de un anillo de metal. Las células cancerosas expresan proteínas nucleares fluorescentes.
Coloque el mouse, boca arriba, en un cuadro de imágenes. El soporte magnético en la caja de imágenes ayuda a asegurar la ventana craneal implantada.
Ahora, transfiera la caja de imágenes dentro de la cámara de imágenes con control ambiental de un microscopio invertido para analizar el comportamiento de las células cancerosas en el cerebro.
En el modo multifotón, ajuste el láser a una longitud de onda adecuada. Concéntrese en la región del tumor para detectar la fluorescencia de las células cancerosas.
Defina una pila z para cada posición para adquirir múltiples imágenes intravitales de células cancerosas en diferentes planos ópticos.
Este paso permite la captura de una proporción significativa de células cancerosas en el microambiente tumoral sin afectar la resolución celular.
Posteriormente, adquirir imágenes desde diferentes posiciones del tumor durante un período prolongado.
El seguimiento de la trayectoria de las células cancerosas en diferentes planos ópticos ayuda a determinar la migración de células tumorales individuales utilizando un software adecuado.
En el punto de tiempo experimental apropiado, coloque el mouse boca arriba en un cuadro de imágenes y configure el objetivo de agua de 25x en la posición z más baja. Agregue una gota grande de agua al objetivo y transfiera la caja de imágenes a la cámara de clima oscuro de 37 grados Celsius del microscopio.
Lleve el objetivo al cubreobjetos de la ventana de imágenes craneales hasta que la gota de agua toque el cubreobjetos y, utilizando el modo de epifluorescencia, observe el tumor a través del ocular para enfocar las células.
Ajuste el láser a la longitud de onda correcta y seleccione el modo en vivo. Después de seleccionar varias posiciones de interés para la obtención de imágenes, registre sus coordenadas en el software. Defina una pila z para cada posición para adquirir el volumen máximo de células tumorales sin comprometer la resolución de las células tumorales, con el tamaño del paso entre imágenes establecido en 3 micrómetros.
Luego, adquiera imágenes del volumen tumoral en diferentes posiciones cada 20 minutos durante 2 horas, agregando agua al objetivo antes de cada adquisición de imagen. Después de adquirir la última imagen, transfiera el mouse a una almohadilla térmica con monitoreo hasta la recuperación completa.