Aislamiento de astrocitos: un método para obtener la preparación pura de astrocitos corticales de ratón
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 6:41 min. • April 30th, 2023
El cultivo in vitro de astrocitos ayuda a investigar el papel biológico de los astrocitos, las células cerebrales más abundantes.
Comience con un cerebro de ratón neonatal colocado bajo un microscopio de disección.
Retire los bulbos olfatorios y el cerebelo.
Realice una incisión en la línea media entre los dos hemisferios para separar la corteza.
Retire las meninges para evitar la contaminación en el cultivo de astrocitos por fibroblastos y células meníngeas.
Transfiera los hemisferios de la corteza a un medio helado y pique en trozos pequeños.
Recoja las piezas corticales en un tubo que contenga tripsina. La tripsina, una enzima proteasa, digiere las proteínas de adhesión celular, facilitando la separación celular.
Centrifugar para granular el tejido digerido.
Retire el sobrenadante y agregue un medio de astrocitos al gránulo. Pipetea vigorosamente para liberar una población celular mixta de astrocitos, microglía y células precursoras de oligodendrocitos u OPC.
Siembre esta suspensión celular en un matraz de cultivo de tejidos recubierto de polilisina e incube.
Las células cargadas negativamente se adhieren a la polilisina cargada positivamente y crecen por toda la superficie para
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