Cultivo de células endoteliales a partir de microvasos cerebrales de rata: un procedimiento para aislar y cultivar células endoteliales a partir de microvasos de cerebro de rata

Para aislar las células endoteliales del cerebro, primero, transfiera un cerebro de rata recolectado a un plato que contenga tampón refrigerado.

Después de extirpar el cerebelo y los nervios ópticos, divida el cerebro en hemisferios cerebrales. Luego, separe el mesencéfalo del prosencéfalo.

Eliminar las meninges y la sustancia blanca que contiene mielina del prosencéfalo, dejando atrás la corteza cerebral para aislar los microvasos.

A continuación, homogeneice la corteza para romper el tejido nervioso y los constituyentes.

Centrifugar el homogeneizado para eliminar los restos celulares y la mielina.

Posteriormente, trate el gránulo de tejido con un cóctel de digestión que contenga enzimas colagenasa, dispasa y desoxirribonucleasa.

Las colagenasas y las dispasas digieren la matriz extracelular que incrusta los microvasos, aflojando los fragmentos de microvasos del tejido. Las desoxirribonucleasas degradan cualquier ADN libre liberado por las células lisadas.

Mezclar el volumen deseado del homogeneizado digerido con un medio de gradiente de densidad adecuado y centrifugar.

Deseche la capa superior que contiene mielina y células del parénquima cerebral, seguida del sobrenadante.

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