Aislamiento de microglía mediante clasificación de células acopladas a inmunotinción: un método de inmunotinción para aislar microglía de células cerebrales de pez cebra mediante clasificación de células activadas fluorescentes
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 3:50 min. • April 30th, 2023
En condiciones patológicas, la microglía activada, macrófagos cerebrales especializados, ayuda a eliminar patógenos y restos celulares. Estas microglías expresan receptores únicos que las diferencian de otros macrófagos.
Para aislar la microglía, comience con un cultivo de células cerebrales derivadas de pez cebra transgénico, que exprese moléculas fluorescentes específicas en diferentes tipos de células.
El cultivo contiene una mezcla de neuronas, que expresan fluorescencia roja, macrófagos, que expresan fluorescencia verde y microglía no fluorescente.
Ahora, agregue un reactivo de bloqueo e incube el cultivo con agitación intermitente. El reactivo de bloqueo se une a los sitios no específicos de las células y reduce la señal de fondo.
A continuación, agregue anticuerpos primarios e incube. Estos anticuerpos se unen a receptores específicos expresados en la superficie de la microglía.
Centrifugar el cultivo y eliminar el sobrenadante que contiene anticuerpos no unidos. Vuelva a suspender el gránulo celular en un medio fresco.
Posteriormente, agregue anticuerpos secundarios conjugados con colorante fluorescente e incube. Estos anticuerpos se unen a los anticuerpos primarios e impar
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