Aislamiento de ADN libre de células circulantes (cfDNA): Un procedimiento de membrana a base de sílice para extraer cfDNA del plasma sanguíneo de pacientes con cáncer
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 4:42 min. • July 8th, 2025
Los ADN libres de células circulantes o cfDNA son fragmentos cortos de ADN liberados principalmente por células cancerosas que sufren apoptosis. Los cfDNA son biomarcadores de cáncer prometedores y se pueden aislar de fluidos corporales como el plasma.
Para aislar el cfDNA, primero, obtenga una muestra de plasma de un paciente con cáncer. A continuación, trate el plasma con un tampón de lisis que contenga proteinasa K, sales caotrópicas y ARN portador. Las sales caotrópicas desnaturalizan las proteínas, liberando cfDNA unidos a las proteínas. La proteinasa K inactiva las nucleasas, minimizando así la degradación del cfDNA.
A continuación, agregue el búfer de enlace deseado al ejemplo. Ensamble una columna de centrifugación que contenga matriz de sílice en fase sólida en el aparato de vacío. Cargue el ejemplo en la columna. Aplique vacío para pasar la muestra a través de la membrana de sílice.
El ARN portador se une de forma no específica a las paredes del tubo. Esta unión inespecífica junto con la presencia de sales en el tampón facilita la unión del cfDNA a la membrana de sílice, aumentando la recuperación de cfDNA. Las proteínas y otros contaminantes no se retienen en la membrana
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