Reacción en cadena de la polimerasa digital en gotasas: un método para generar reacciones de PCR con nanogotas para detectar mutaciones tumorales raras

La tecnología de reacción en cadena de la polimerasa digital en gotas o dPCR divide los reactivos de una sola reacción de PCR en millones de reacciones de PCR de nanogotas. Esta partición masiva seguida de amplificación detecta una cantidad diminuta de ADN mutante contra un gran fondo de ADN de tipo salvaje, lo que permite la detección temprana del cáncer.

Para comenzar, aspire la mezcla maestra de dPCR que contiene oligonucleótidos marcados con fluorescencia junto con otros reactivos de PCR y un aceite estabilizador de gotas. Agregue esta mezcla maestra directamente en el fondo de cada pocillo en un tubo de tira de PCR para evitar burbujas de aire. A continuación, agregue muestras de ADN a la mezcla de reacción y pipetee varias veces para mezclar.

Ahora, transfiera toda la mezcla de reacción a un chip especializado de un instrumento generador de gotas. Monte un tubo de tira de PCR nuevo en el instrumento generador de gotas. El generador de gotas combina la muestra y el aceite para formar nanogotas discretas con un área encapsulada que evita la contaminación cruzada entre las gotas.

Una vez completada la gota, transfiera el tubo de tira de PCR a un termociclador para amplificar el