Marcaje fluorescente de células de glioma: un método de transfección basado en vectores lentivirales para obtener células de glioma que expresan proteínas fluorescentes para la obtención de imágenes de tejidos profundos

Las imágenes de cáncer cerebral in vivo implican inyectar células cancerosas marcadas con fluorescencia en el cerebro del ratón para observar el desarrollo del tumor. Para el marcado fluorescente, incube las células de glioma con partículas de lentivirus. El vector lentiviral lleva el gen de la proteína fluorescente infrarroja, iRFP.

El virus se une a la superficie celular del glioma y libera ARN en la célula. Las enzimas celulares convierten el ARN viral en ADN bicatenario, que se integra en el genoma celular y permite la expresión de iRFP. Los máximos de excitación y emisión de iRFP se encuentran dentro de una región del infrarrojo cercano donde los tejidos tienen una absorbancia y dispersión mínimas. Esto permite obtener imágenes precisas de tejidos profundos.

A continuación, retire el medio gastado y agregue tripsina. La tripsina, una enzima proteasa, digiere las proteínas de adhesión, separando las células de la superficie del matraz. Pipetear repetidamente para separar las células individuales. Recoja la suspensión celular en un tubo y centrifuge. Ahora, agregue un tampón adecuado para volver a suspender el gránulo.

Dispense la suspensión celular en tubos de citometría de flu