Zimografía de péptidos fluorescentes: una técnica modificada para detectar la actividad de la proteasa utilizando sustratos fluorogénicos en geles de zimograma
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 3:05 min. • July 8th, 2025
La zimografía es una técnica electroforética que involucra un sustrato proteico copolimerizado con gel de poliacrilamida para detectar enzimas hidrolíticas y su actividad. Para comenzar, disuelva las muestras en un tampón de zimografía que contenga glicerol, dodecil sulfato de sodio o SDS y azul de bromofenol.
El glicerol hace que el tampón de muestra sea más denso que el tampón de funcionamiento circundante del gel, lo que permite una fácil carga en las bolsas de gel. SDS, un detergente aniónico, desnaturaliza las enzimas de la muestra y las recubre con una carga negativa. El azul de bromofenol, un colorante de seguimiento, ayuda a controlar el progreso de la muestra en el gel.
Cargue las muestras en gel de poliacrilamida incrustado con sustratos fluorogénicos para detectar la actividad de la proteasa. Ahora, conecte los electrodos y comience la electroforesis. El campo eléctrico generado hace que todas las enzimas unidas a SDS migren a través del gel hacia el electrodo cargado positivamente.
Una vez finalizada la electroforesis, retire el gel y lávelo en un tampón de renaturalización que contenga detergente no iónico que desplace a SDS para permitir la renaturalización de la enzi
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