Modelo de invasión perineural murina: generación de un modelo in vivo para simular la invasión perineural en el nervio ciático de ratón

La invasión perineural es un fenómeno metastásico poco frecuente en el que las células cancerosas hacen metástasis fuera del sitio de origen para invadir el espacio perineural dentro de los nervios. El microambiente nervioso proporciona un entorno adecuado para el crecimiento y la proliferación del cáncer.

Para simular la invasión perineural in vivo, prepare un ratón anestesiado en posición prona. Haga una pequeña incisión paralela debajo del fémur. Separe los músculos del muslo para revelar el nervio ciático subyacente, el nervio más grande y de más fácil acceso en el cuerpo.

El nervio ciático se origina en la parte inferior de la columna vertebral y atraviesa los músculos pélvicos hasta cada pierna. Transmite señales para el movimiento coordinado de las extremidades inferiores. Luego, retire los músculos circundantes del nervio y tire de él hacia afuera con una espátula esterilizada para la inyección.

Ahora, tome una jeringa llena de la suspensión de células cancerosas e inyéctela paralelamente en el nervio. Una protuberancia visible en el nervio confirma una inyección exitosa, mientras que cualquier fuga alrededor del lugar de la inyección indica un intento fallido. Brevemente, permita que las células se estabilicen dentro del nervio.

Luego, retraiga suavemente la aguja y vuelva a colocar los músculos. Posteriormente, sutura la incisión. Deje que el mouse se recupere. Eventualmente, las células cancerosas comienzan a migrar desde el lugar de la inyección hacia la médula espinal, lo que confirma la invasión perineural.

El día antes de la cirugía, retire el pelaje a lo largo del fémur en el lado dorsal de un ratón C57BL / 6J macho o hembra de 8 semanas de edad con una maquinilla quirúrgica o un agente químico de depilación. El día de la cirugía, desinfecte el escenario, anestesia a los ratones con isoflurano al 2% en una cámara de inducción y aplique ungüento veterinario en los ojos para evitar la sequedad bajo anestesia.

Inyecte la cantidad de analgésico apropiada para el peso por vía subcutánea y transfiera un ratón a un cono nasal en el área quirúrgica. Se proporciona soporte térmico durante todo el procedimiento quirúrgico. Coloque el ratón anestesiado sobre su lado ventral y asegure suavemente cada extremidad con cinta hipoalergénica para crear una tensión leve en la extremidad que se va a inyectar.

Limpie el lugar de la inyección con un hisopo de betadine, luego nuevamente con alcohol al 70%. Repita este proceso dos veces más y asegúrese de que no quede cabello suelto en el campo quirúrgico. Como paso final, aplique la solución de betadine en el área quirúrgica. Después de ponerse guantes estériles y colocar el paño estéril, use una herramienta estéril dedicada para aplicar el pellizco de los dedos de los pies antes de hacer la incisión debajo del paño.

Luego, use unas tijeras pequeñas estériles para hacer una incisión de 1 centímetro aproximadamente 2 milímetros por debajo y paralela al fémur. Retraiga la piel con fórceps lateralmente para exponer los músculos debajo. Separe los músculos del glúteo mayor y el bíceps femoral a lo largo de un plano fascial y exponga el nervio ciático debajo. Libere el nervio de los músculos circundantes mediante una disección roma.

Extraiga 3 microlitros de células cancerosas del gránulo en una jeringa estéril de 10 microlitros. Coloque una pequeña espátula de metal debajo del nervio en el punto de inyección para apoyarse. Mientras visualiza con el microscopio de disección, mantenga la aguja paralela al nervio e insértela en el nervio. Tenga cuidado de no perforar la parte posterior del nervio.

Inyecte lentamente las células en el nervio durante 5 segundos. La formación de un bulbo en el área de inyección indica una buena inyección. Deje la aguja en su lugar durante 3 segundos para minimizar el reflujo antes de retirar la aguja suavemente. La inyección adecuada de las células cancerosas en el nervio ciático es fundamental. Si las células se inyectan fuera del nervio, la consistencia de la invasión se verá afectada. Sin embargo, con la práctica y la experiencia, esto es muy raro.

Después de la inyección, regrese el nervio a su posición original y cubra el nervio con los músculos suprayacentes. Trate a los ratones con la analgesia adecuada y luego cierre la piel con suturas de nailon 5-0. Coloque al ratón solo en una jaula limpia para observación y proporcione soporte térmico durante la recuperación hasta que haya recuperado la conciencia suficiente para mantener la decúbito esternal.