Administración intranasal de células madre neurales terapéuticas (NSC) en un modelo murino: un procedimiento para la administración dirigida al tumor de NSC cargadas con virus oncolíticos en un modelo de ratón portador de tumores cerebrales

Para comenzar, someta un cultivo de células madre neurales o NSC a condiciones de bajo oxígeno. Este preacondicionamiento facilita una mayor proliferación de NSC y capacidades de orientación tumoral. A continuación, recolecte las NSC y trátelas con la concentración deseada de virus oncolítico de replicación condicional. Incubar para cargar los virus en las células.

Ahora, centrifuga el cultivo para eliminar los virus no unidos. Vuelva a suspender las NSC cargadas de virus en un tampón adecuado. Mientras tanto, coloque un ratón con tumor cerebral anestesiado en posición supina para facilitar el acceso a las fosas nasales. Administre cuidadosamente las NSC cargadas de virus en cada fosa nasal del ratón, repitiendo a intervalos cortos de tiempo.

Deje que el mouse se recupere. Las NSC administradas por vía intranasal en la cavidad nasal evitan la barrera hematoencefálica para ingresar al cerebro. Dentro del cerebro, el virus se replica dentro de estas células preacondicionadas y migra al sitio del tumor, protegiéndose del sistema inmunológico. Con el tiempo, las partículas virales liberadas por las NSC interactúan y se unen a receptores específicos de la superficie celular sobreexpresados en las células tumorales.

Después de la internalización del virus, estos virus que se replican condicionalmente se replican preferentemente en las células tumorales y causan lisis celular. Las células tumorales lisadas liberan partículas virales, que infectan las células tumorales circundantes, lo que lleva a una cascada de infección y lisis de células tumorales. La lisis celular expone los antígenos tumorales, activando una respuesta inmune contra las células tumorales.

Para cargar células madre neurales humanas con virus oncolítico, infecte las células madre con 50 réplicas condicionales de partículas virales de adenovirus por célula de acuerdo con los protocolos estándar de transfección de adenovirus durante 2 horas a temperatura ambiente con golpecitos periódicos. Luego, lave las células tres veces con medio nuevo para eliminar cualquier partícula viral no unida y suspenda las células en solución salina estéril para su administración intranasal.

Cuando las células se hayan modificado según sea apropiado experimentalmente, coloque a los animales anestesiados portadores de tumores en posición supina sobre un paño limpio sobre una almohadilla térmica y coloque una almohada acolchada debajo de las cabezas para mantener las fosas nasales en un ángulo vertical. El material de la almohada debe ser plástico que se puede limpiar con alcohol o toallas de papel enrolladas desechables para evitar la contaminación cruzada de animales.

Cuando los ratones estén en posición, use una micropipeta para dispensar 2 microlitros de la población experimental de células madre neurales humanas de interés en cada fosa nasal del primer ratón, confirmando visualmente la aspiración de la gota antes de aplicar el siguiente volumen de células. Repita la entrega a cada mouse por turno. Luego, espere 5 minutos y aplique la siguiente ronda de células. Cuando se hayan administrado las cuatro rondas de células, coloque a los animales en una cámara de recuperación con monitoreo hasta la recuperación completa.

• Neural Stem Cells (NSCs) - Preconditioned cells exposed to low oxygen for improved proliferation.
• Cell Washing Procedure - A method to remove unbound entities, in this context, virus.
• Stem Cell Flow Chart - A graphical representation to outline the stem cell procedures.
• Murine Stem Cell Virus - An oncolytic virus used in research for its tumor-targeting properties.
• Stem Cell Delivery - Process of injecting stem cells (here, into nostrils).

• Introduce NSCs - Neural stem cells enhanced for tumor-targeting (e.g., NSCs).
• Key Concepts - Overview of oncolytic virus utilization within NSCs (e.g., theory of stem cell delivery).
• Underlying Mechanisms - NSCs carry virus to brain tumors, leading to cell lysis (e.g., mechanisms of murine stem cell virus).
• Connect to Experiment - Experiment uses virus-loaded NSCs injected into mice nostrils, targets brain tumor.

• [Question 1] What are neural stem cells and how do they target tumors?
• [Question 2] How does the process of cell washing work?
• [Question 3] What role does the murine stem cell virus play in tumor destruction?

• Practical Applications - Invasive brain tumor treatments (e.g., using NSCs).
• Industry Impact - Potential benefits for cancer treatment sectors (e.g., healthcare).
• Societal Importance - Improved life quality of brain tumor patients (e.g., via better treatment options).
• Link to Scientific Advancements - A step forward in oncolytic virus research and NSC technology.