Aislamiento de vasos cerebrales de ratón: un protocolo para aislar vasos intactos de una muestra de cerebro murino

Los vasos cerebrales están rodeados por una capa de células endoteliales estrechamente conectadas. Estas células tienen una membrana basal a su alrededor junto con componentes celulares como pericitos y astrocitos.

Para aislar los vasos cerebrales de las neuronas circundantes y las células gliales, tome un vaso de precipitados que contenga cerebro de ratón sumergido en un tampón de homogeneización. Pícalo en trozos pequeños. Homogeneizar el tejido cerebral para disociarlo, liberando neuronas, células gliales y vasos cerebrales. Este tratamiento también interrumpe la vaina de mielina que rodea las neuronas.

Transfiera el homogeneizado a un tubo y centrifugue para peletizar los recipientes. Los componentes más ligeros, como las neuronas y las células gliales, permanecen en el sobrenadante, mientras que la mielina forma una densa capa de interfaz que rodea el gránulo.

Deseche el sobrenadante y vuelva a suspender el sedimento del recipiente con la capa de mielina adherida en un medio de gradiente de densidad adecuado. Centrifugar para granular los recipientes y obtener una banda de mielina rica en grasa flotando en la parte superior del sobrenadante. Retire la banda de mielina junto co