Ensayo de fagocitosis in vitro: un método basado en imágenes en vivo para estudiar la fagocitosis sinaptosómica mediada por astrocitos en tiempo real

Los sinaptosomas son fracciones neuronales aisladas ricas en vesículas sinápticas. Estos sinaptosomas son engullidos por astrocitos, una población de células inmunes en el cerebro, mediante un proceso conocido como fagocitosis.

Para estudiar la fagocitosis mediada por astrocitos in vitro, comience tomando una placa de cultivo que contenga una monocapa de astrocitos. Ahora, agregue la suspensión de sinaptosomas conjugados con indicador de pH a la placa. Este colorante indicador tiene la propiedad de emitir fluorescencia exclusivamente a un pH bajo. Incube la placa durante la duración deseada.

Durante la incubación, la fosfatidilserina o PS presente en la membrana externa del sinaptosoma le permite unirse a los receptores PS correspondientes en la membrana de los astrocitos. Esto facilita el asentamiento de sinaptosomas en la base. Aspirar los medios gastados junto con los sinaptosomas no ligados del plato.

A continuación, complemente la placa con factores promotores de la fagocitosis e incube. Posteriormente, obtenga imágenes de la placa con un microscopio de fluorescencia. Al unirse a la superficie, los astrocitos engullen los sinaptosomas y hacen que entren en los fagosomas. Una v