Electroporación ex vivo de rodajas cerebelosas de embriones de pollo: un método para introducir ADN plasmídico que codifica la proteína verde fluorescente para visualizar el desarrollo celular granular
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 4:21 min. • July 8th, 2025
Las células granulares cerebelosas son el tipo de neuronas más abundante del cerebro. La capa granular externa, EGL, está compuesta únicamente por precursores celulares granulares, GCP, que se diferencian y migran hacia adentro para formar la capa granular interna, IGL.
Para visualizar el desarrollo de células granulares, prepare una cámara de electroporación uniendo un ánodo a la base de una placa de Petri. Agregue medio de cultivo para cubrir el electrodo. Ahora, coloque un inserto de cultivo en el electrodo cubierto con medio. Transfiera las rodajas de cerebelo del embrión de pollo al inserto de cultivo en orientación sagital.
El plano sagital permite identificar la capa diana-EGL frente a diferentes capas del cerebelo. Agregue una solución de colorante viscoso que contenga un ADN plasmídico GFP sobre EGL. El ADN plasmídico GFP codifica una proteína fluorescente verde que se distribuye homogéneamente dentro del citoplasma celular y permite la obtención de imágenes de células vivas.
A continuación, coloque un cátodo en el medio cerca de EGL pero no directamente sobre el tejido. Luego, aplique múltiples pulsos eléctricos a diferentes regiones de EGL. Los pulsos eléctricos inducen
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