Electroporación de una sola célula en cultivos organotípicos de cortes de cerebro: una técnica in vitro para administrar plásmidos dentro de neuronas específicas en cortes de hipocampo cerebral

Comience la electroporación tomando una pipeta de vidrio que contenga la solución plásmida deseada. Conéctelo a un soporte de micropipeta equipado con un electrodo de alambre plateado, asegurándose de que el electrodo esté insertado en la micropipeta. Tome una cámara de electroporación que contiene una sección ultradelgada del hipocampo sumergida en líquido cefalorraquídeo artificial.

Sumerja el electrodo de tierra en el fluido presente en la cámara para su posterior electroporación. Baje la punta de la pipeta a la cámara de electroporación y registre la resistencia de referencia. Utilice un microscopio para colocar la punta de la pipeta cerca de la célula diana. Una vez que la pipeta está en contacto con la membrana neuronal, su resistencia aumenta bruscamente.

Aplique presión de aire positiva para crear una pequeña invaginación en la membrana neuronal. Aplique rápidamente una succión suave para empujar la membrana hacia arriba, creando un sello suelto entre la punta de la pipeta y la membrana. Repita este proceso unas cuantas veces más para acondicionar la membrana y evitar la lisis celular.

Después del acondicionamiento, aplique una succión fuerte para formar un sello hermético