Aislamiento de neuronas de la médula espinal: un procedimiento de gradiente de densidad para aislar neuronas de la médula espinal neonatal para estudios in vitro
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 6:10 min. • December 22nd, 2025
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Figura 1: Columna vertebral disecada y médula espinal liberada de un ratón neonatal de 3 días de edad. La flecha en (a) apunta hacia el extremo caudal de la columna vertebral, donde se inserta una aguja para liberar la médula espinal. Una médula espinal liberada (b) se muestra sumergida en PBS.
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Figura 2: Gradiente de densidad, con células añadidas después de la centrifugación.<
Para aislar las neuronas de la médula espinal, tome una columna vertebral de un ratón neonatal y colóquela en una placa de Petri. Enjuague la columna vertebral con un amortiguador salino para liberar la médula espinal. Transfiera la médula espinal a un medio neuronal frío para promover la supervivencia celular.
A continuación, pica la médula espinal y transfiere los fragmentos a un tubo que contenga medio neuronal fresco. Incube el tubo en un baño de agua agitador para aclimatación. Después de la incubación, retire el medio gastado y agregue el medio de digestión. Las enzimas digestivas escinden la matriz del tejido para aflojar las células.
Realice la trituración aspirando los fragmentos de tejido en la pipeta y vacíe rápidamente los componentes, liberando células individuales en suspensión. Luego, transfiera esta suspensión a un tubo que contenga medio de gradiente de densidad y centrífuga.
Después de la centrifugación, la capa superficial del tubo contiene restos de tejido. La primera capa incluye oligodendrocitos y astrocitos. La segunda y tercera capas comprenden neuronas, y la tercera capa tiene la mayor pureza. Por último, el gránulo contiene células microgliales.
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