Silenciamiento génico basado en interferencias CRISPR: una técnica para la represión dirigida de la función génica en leptospira patógena
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 7:27 min. • July 8th, 2025
La interferencia CRISPR o CRISPRi, utiliza una variante desactivada de Cas9, dCas9, para el silenciamiento génico dirigido, que reprime la función génica.
Para realizar CRISPRi, use una construcción de vector lanzadera: un plásmido que contiene orígenes de replicación correspondientes a las bacterias E. coli y Leptospira, lo que facilita la propagación en ambas especies.
El vector también contiene una secuencia específica para el gen dCas9 y un ARN de guía única o sgRNA, para reconocer la secuencia diana.
Inicialmente, el vector lanzadera está presente dentro de la E. coli donante. Complemente el cultivo de E. coli del donante con el huésped Leptospira para facilitar la conjugación. La conjugación establece un contacto directo de célula a célula entre organismos, lo que facilita la captación del plásmido por Leptospira. Dentro de la célula, la construcción del plásmido produce secuencias de sgRNA y expresa proteínas dCas9.
El sgRNA contiene una región protoespaciadora que reconoce su región diana complementaria en el ADN de Leptospira, cerca del motivo adyacente al protoespaciador o PAM, una secuencia de reconocimiento corta en el ADN del huésped. Esto ayuda a dCas9 a formar un com
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