Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 3:12 min. • July 8th, 2025
Comience con un modelo de ratón modificado genéticamente que comprende un genoma modificado que alberga sitios LoxP, secuencias específicas reconocidas por enzimas Cre-recombinasa, que flanquean el gen de interés. El ratón se transfecta además con un vector plásmido que codifica la recombinasa CreER específica del órgano, lo que lleva a la integración del elemento expresor de la recombinasa CreER en el genoma de las células hepáticas.
La recombinasa CreER expresada, una proteína de fusión inactiva que involucra la Cre recombinasa y el dominio de unión al ligando mutante del receptor de estrógeno, ER, interactúa y se une a la proteína de choque térmico en el citoplasma. Esta unión confina la recombinasa CreER en el citoplasma.
Prepare una solución de tamoxifeno, un medicamento hidrofóbico, usando etanol y aceite adecuado. Ahora, inyecte la solución de tamoxifeno por vía intraperitoneal en el cuadrante inferior izquierdo del abdomen del ratón para evitar daños en los órganos abdominales.
El tamoxifeno inyectado se metaboliza en el hígado a 4-hidroxitamoxifeno, 4-OHT. Además, el 4-OHT, un modulador selectivo del receptor de estrógeno, se une al dominio de unión al ligando ER de la rec
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