Expresión génica inducible basada en el sistema regulable por Tet-On in vivo: un sistema de expresión génica inducido por tetraciclina para la activación de la transcripción de genes diana en un modelo de ratón
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 3:27 min. • July 8th, 2025
El sistema tetraciclina-On o Tet-On es un sistema de expresión génica condicional que activa la expresión del gen de interés en presencia de tetraciclina o su análogo, la doxiciclina.
Comience con un ratón modificado genéticamente con un genoma modificado que contiene un gen que codifica la proteína activadora transcripcional controlada por tetraciclina inversa, o rtTA, impulsada por un promotor específico del hígado en las células hepáticas o los hepatocitos. Además, el ratón contiene un gen de interés bajo el control del operador de tetraciclina o secuencias de tetO ubicadas aguas arriba y fusionadas selectivamente a un promotor mínimo. El tetO y el promotor se denominan elemento sensible a la tetraciclina, o TRE.
El rtTA expresado, una proteína de fusión que comprende el represor tet, tetR y el dominio de transactivación de la proteína viral VP16, forma dímeros, que están inactivos y no pueden unirse a la secuencia tetO del TRE, lo que impide la activación de la expresión génica diana.
Prepare una solución que contenga doxiciclina y sacarosa. La adición de sacarosa aumenta la palatabilidad. Después del filtrado, proporcione la solución de doxiciclina-sacarosa como agua potable a
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