Silenciamiento génico in vitro basado en transfección inversa de siRNA: un procedimiento para administrar pequeño ARN interferente en células cultivadas para inactivar la expresión génica diana

Para la transfección inversa de ARN interferente pequeño, o ARNip, una clase de ARN bicatenario, en adipocitos o células grasas no adherentes, prepare una suspensión de ARNip dirigidos a un gen codificador de proteínas específico en los adipocitos. Agregue un reactivo de transfección adecuado a base de lípidos catiónicos. Incubar la mezcla para formar complejos de transfección a través de interacciones electrostáticas.

Transfiera la mezcla a pocillos recubiertos de colágeno de una placa de pocillos múltiples. Los complejos de transfección se inmovilizan en el recubrimiento de la placa por interacciones no específicas. Pipetee una suspensión de adipocitos en pocillos que contienen complejos de transfección inmovilizados. Los adipocitos se adhieren libremente al recubrimiento de la placa, aumentando el contacto físico entre las células y los complejos.

El complejo de transfección se fusiona con la membrana celular y entrega el ARNip al citoplasma. El ARNip, que comprende una hebra antisentido con una secuencia complementaria para dirigirse al ARNm y una hebra de sentido, es reconocido por el complejo silenciador inductor de ARN multiproteico, o RISC. El ARNip se une al RISC y las heb