Edición de genes mediada por morfolinos: una técnica de eliminación de genes que utiliza oligonucleótidos de morfolino bloqueantes traslacionales en huevos unicelulares de peces de cueva

Los morfolinos son oligonucleótidos rediseñados cortos, monocatenarios, con diferencias en su columna vertebral de fosfato y estructura de azúcar en comparación con los nucleótidos naturales. Estas características mejoran la estabilidad de los morfolinos en el pH fisiológico. A pesar de estas variaciones, los morfolinos contienen las nucleobases estándar, que ayudan a diseñar oligonucleótidos complementarios a la secuencia específica de ARNm de un gen diana deseado para ser eliminado.

Para realizar la edición de genes impulsada por morfolino, comience tomando huevos unicelulares de peces de las cavernas colocados dentro de los pocillos de una placa de inyección de agarosa. Visualice los huevos translúcidos y redondos para ubicar el saco vitelino, una estructura llena de líquido presente dentro del huevo.

Tome una aguja de microinyección precargada con una solución que contenga morfolinos diseñados. Inyecte la solución directamente en la yema de huevo, asegurándose de que los morfolinos entren en el citoplasma celular. Dentro de las células, el gen diana forma el ARNm, que se transporta al citoplasma.

Dentro del citoplasma, la morfolino inyectada se hibrida con su transcripción de A