Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 5:40 min. • July 8th, 2025
Comience con embriones viables de pez cebra en etapa unicelular colocados en los pocillos de un molde de microinyección.
Cargue una aguja de microinyección con una solución que contenga ARNm que codifica la transposasa Tol2 y plásmidos donantes de transposones. Los plásmidos comprenden un promotor ubicuo del pez cebra y un gen fluorescente que codifica proteínas flanqueado por brazos transposones Tol2.
Inyecte con cuidado la solución de microinyección en el citoplasma del embrión de pez cebra. Dentro de la célula, los ARNm de transposasa Tol2 se traducen en proteínas transposasa Tol2 y se transportan activamente al núcleo.
Los sitios Tol2 en el plásmido donante comprenden repeticiones terminales invertidas específicas, o ITR, que flanquean el gen informador. Los RTI están flanqueados por repeticiones cortas y directas. Las proteínas transposasa reconocen y se unen a los sitios ITR, formando una horquilla en el ADN flanqueante. Las transposasas escinden aún más la construcción del transposón del ADN flanqueante, liberándolo del plásmido y dejando repeticiones cortas y directas.
Las transposasas crean una ruptura escalonada de doble hebra en el genoma de la célula somática e insertan
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