Purificación de proteínas basada en cromatografía de intercambio aniónico: una técnica de separación para aislar una proteína de interés del lisado bacteriano dializado basada en la carga neta

Para la separación por cromatografía de intercambio aniónico de una proteína de interés de un lisado de proteína bacteriana dializado, agregue un tampón de unión para reducir la viscosidad del lisado y evitar que obstruya la columna cromatográfica.

Los agentes quelantes en el tampón se unen a cationes divalente, inhibiendo la actividad de la proteasa y evitando la degradación de las proteínas. Además, el tampón con pH por encima del punto isoeléctrico de la proteína diana, pI, el pH al que la proteína no tiene carga neta, hace que el exceso de iones hidroxilo cargados negativamente neutralice los grupos amina cargados positivamente de la proteína, lo que hace que la superficie de la proteína se cargue negativamente.

Ensamble la columna de cromatografía de intercambio aniónico que contiene una fase estacionaria reticulada basada en agarosa con grupos de aminas cuaternarias cargados positivamente. Agregue el tampón de unión para preparar la columna para la máxima interacción de proteínas durante la carga de la muestra. Cargue el lisado bacteriano diluido.

Las proteínas diana cargadas negativamente se unen más estrechamente a los grupos cargados positivamente en la columna que las pro